DSS 诱导结肠炎模型
葡聚糖硫酸钠(DSS)经饮水给予诱导小鼠急性与慢性结肠炎。急性期表现为腹泻、肉眼直肠出血与体重下降,剖检见左半结肠多发糜烂与包括隐窝脓肿在内的炎症改变;反复损伤后进入慢性期,出现糜烂、黏膜显著再生(含异型增生)、大肠缩短与淋巴滤泡频繁形成。
Outcome measures
获得可供光学显微镜观察的 H&E 染色组织切片:细胞核蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维粉红色,用于观察组织中细胞的整体结构与形态细节。本方案本身不产出病理评分数值,也不提供特定分子标志物的定量结果。
每只动物每日三项分值、总 DAI(0–12)及其时间变化。
Experimental animals
- Age
- 10 周龄(2.5% DSS 饮水 5 天,随后恢复 5 天)
- Sex
- Male
- Tissue
- colon(结肠,Swiss roll)
- Age
- 10 周龄(2.5% DSS 饮水 5 天,随后恢复 5 天)
- Sex
- Male
- Tissue
- colon(结肠,Swiss roll)
- Age
- 10 周龄(2.5% DSS 饮水 5 天,随后恢复 5 天)
- Sex
- Male
- Tissue
- colon(结肠,Swiss roll)
- Age
- 未记载周龄,终点取材组织切片 HE 判读(离体)
- Sex
- Male
- Tissue
- colon(结肠,Swiss roll)
- Age
- 6–8 周龄
- Sex
- Male
- Tissue
- 活体观察(体重、粪便性状、便血)
Experimental procedures
脱蜡(Dewaxing) 石蜡切片置于二甲苯中脱蜡 3 次,每次 00:03:00。 复水(Rehydration) 石蜡切片依次置于 100% 乙醇中 3 次、每次 00:03:00,再置于 95% 乙醇中 1 次、00:03:00,随后用水漂洗。 苏木素核染色(Hematoxylin staining) 石蜡切片以苏木素染液染色 00:00:20,随后在流水下冲洗 00:01:00。 分化与返蓝(Differentiation and bluing) 石蜡切片置于返蓝液中 00:01:00,随后在流水下冲洗 00:01:00;此步使细胞核呈现蓝色。 伊红染色(Eosin staining) 石蜡切片以伊红复染 00:00:10;此步使细胞质成分与结缔组织纤维呈现粉红色。 脱水与透明(Dehydration and Clearing) 石蜡切片依次置于 95% 乙醇中 00:02:00、100% 乙醇中 2 次、每次 00:02:00,随后置于二甲苯中 2 次、每次 00:02:00。 封片(Mounting) 石蜡切片以 Permount 封片介质加盖玻片封固。
动物识别 动物具有可区分的个体标识,记录与观察始终对应到同一只动物。 逐只称重 将每只小鼠分别放入小盒称重;每日以 g 为单位记录体重,精确到十分位。 收集粪便 将小鼠暂留各自的小盒,直至排出粪便。 观察肛周 小鼠排便后送回原笼,同时观察肛周是否有出血或粪便涂抹。 制备检测卡 用涂抹棒将粪便涂抹到检测卡指定区域,观察粪便外观、涂抹时的性状及可见血液。 检查渗透 打开检测卡另一侧,观察粪便涂抹面是否向背面渗透。 粪便性状评分 粪便性状:0 为干燥紧实、易碎而不涂抹;1 为稍松散、黏稠;2 为在 1 的基础上可见卡片背面渗透;4 为在 2 的基础上可见肛周粪便涂抹;本评分表不设 3 分项。 加入显色液 向检测卡背面及其下方的质量控制区各加入两滴显色液。 核对质控 至少等待 30 s,确认阳性对照点呈蓝色、阴性对照点不呈蓝色。 读取隐血结果 查看粪便涂抹面;出现蓝色判为阳性。 便血评分 便血:0 为粪便无血且隐血阴性;2 为粪便无可见血但隐血阳性;3 为粪便可见血且隐血阳性;4 为在 3 的基础上肛周可见血;本评分表不设 1 分项。 体重丢失评分 体重丢失:0 为低于 2%;1 为 2.0–7.99%;2 为 8.0–13.99%;3 为 14.0–19.99%;4 为超过 20%。 合计 DAI 将粪便性状、便血与体重丢失三项分值相加,得到总 DAI 分值,用于统计分析与可视化。
Model identity
- Model name
- DSS 诱导结肠炎模型
- Species
- mouse
- Taxonomy ID
- 10090
- Strain
- C57BL/6 品系族(C57BL/6J 与未标亚系的 C57BL/6 研究按原文区分;J 与 N 亚系差异见背景说明)
- Genetic background
- C57BL/6J 为 MGI 品系记录中的近交系(别称 B6、B6J、Black 6 等),是 C57BL/6 品系下两个常用亚系之一(另一为 C57BL/6N);J 与 N 亚系遗传上可区分且多项表型存在已知差异,未标亚系的 C57BL/6 记录与 C57BL/6J 记录不等同。
Biological characteristics
- Research questions
- 可重复的实验性急性与慢性溃疡性结肠炎范式建立;肠道菌群变化(Bacteroides distasonis 与 Clostridium spp. 增多)及结肠黏膜巨噬细胞对 DSS 的部分吞噬在发病中的作用;慢性期黏膜再生、异型增生与淋巴滤泡的病理演变;结肠炎与肠外结局的关联(如继发应激易感性与抑郁样行为、恢复期菌群属级改变)。
- Limitations
- 急性炎症在停用 DSS 后可恢复至对照水平,持续的慢性病理依赖重复给药周期;模型表型与肠道菌群组成变化相关;不同研究的 DSS 浓度、周期与品系条件不统一,跨研究结局不能直接比较。
Experimental methods
Experimental protocols
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
Hematoxylin and eosin (H&E) staining of fixed, paraffin-embedded tissue sections (4 μm). The workflow covers dewaxing, rehydration, hematoxylin nuclear staining, bluing, eosin counterstaining, dehydration and clearing, and coverslipping, yielding blue-purple nuclei and pink cytoplasm and connective tissue fibers for light-microscopic assessment of cellular and tissue morphology.
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
Hematoxylin and eosin (H&E) staining of fixed, paraffin-embedded tissue sections (4 μm). The workflow covers dewaxing, rehydration, hematoxylin nuclear staining, bluing, eosin counterstaining, dehydration and clearing, and coverslipping, yielding blue-purple nuclei and pink cytoplasm and connective tissue fibers for light-microscopic assessment of cellular and tissue morphology.
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
Hematoxylin and eosin (H&E) staining of fixed, paraffin-embedded tissue sections (4 μm). The workflow covers dewaxing, rehydration, hematoxylin nuclear staining, bluing, eosin counterstaining, dehydration and clearing, and coverslipping, yielding blue-purple nuclei and pink cytoplasm and connective tissue fibers for light-microscopic assessment of cellular and tissue morphology.
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
Hematoxylin and eosin (H&E) staining of fixed, paraffin-embedded tissue sections (4 μm). The workflow covers dewaxing, rehydration, hematoxylin nuclear staining, bluing, eosin counterstaining, dehydration and clearing, and coverslipping, yielding blue-purple nuclei and pink cytoplasm and connective tissue fibers for light-microscopic assessment of cellular and tissue morphology.
- DSS 结肠炎逐日 DAI 评分与粪便隐血检测
Daily mouse colitis scoring combines body-weight loss, stool consistency and Hemoccult SENSA fecal occult blood testing. Each component ranges from 0 to 4 and the combined DAI ranges from 0 to 12.
Reagents and materials
- 组织学二甲苯(混合异构体)
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂(去除二甲苯)
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水(组织学染色用)
复水后漂洗用水(后续各流水冲洗共用)
- Epredia Signature Series 苏木素染液(7221)
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液(7301)
返蓝(使细胞核转蓝)
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液(7111)
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂(Fisher SP15)
封片介质
- Permount 组织学封片剂(Fisher SP15)
封片介质
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液(7111)
细胞质与结缔组织纤维复染
- Epredia Signature Series 返蓝液(7301)
返蓝(使细胞核转蓝)
- Epredia Signature Series 苏木素染液(7221)
细胞核染色
- 自来水(组织学染色用)
复水后漂洗用水(后续各流水冲洗共用)
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- Ethanol
复水梯度溶剂(去除二甲苯)
- 组织学二甲苯(混合异构体)
脱蜡剂
- 组织学二甲苯(混合异构体)
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂(去除二甲苯)
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水(组织学染色用)
复水后漂洗用水(后续各流水冲洗共用)
- Epredia Signature Series 苏木素染液(7221)
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液(7301)
返蓝(使细胞核转蓝)
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液(7111)
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂(Fisher SP15)
封片介质
- 组织学二甲苯(混合异构体)
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂(去除二甲苯)
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水(组织学染色用)
复水后漂洗用水(后续各流水冲洗共用)
- Epredia Signature Series 苏木素染液(7221)
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液(7301)
返蓝(使细胞核转蓝)
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液(7111)
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂(Fisher SP15)
封片介质
- 粪便隐血检测试剂盒
Hemoccult SENSA 粪便隐血检测及显色
References
- Okayasu I, Hatakeyama S, Yamada M, Ohkusa T, Inagaki Y, Nakaya R. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 1990;98(3):694-702. DOI:10.1016/0016-5085(90)90290-h; PMID:1688816. 摘要逐句支持:3%–10% DSS 饮水 6–10 天急性期(腹泻、直肠出血、体重下降、左半结肠糜烂与隐窝脓肿);5 个周期后慢性期(糜烂、再生含异型增生、大肠缩短、淋巴滤泡);Bacteroides distasonis 与 Clostridium spp. 显著增多;DSS 被结肠黏膜巨噬细胞部分吞噬。通用 DSS 模型文献依据;原始摘要未载明品系,不是所记录 C57BL/6J 背景的证据。
- Komoto M, Asada A, Ohshima Y, Miyanaga K, Morimoto H, Yasukawa T, Morito K, Takayama K, Uozumi Y, Nagasawa K. Dextran sulfate sodium-induced colitis in C57BL/6J mice increases their susceptibility to chronic unpredictable mild stress that induces depressive-like behavior. Life Sci. 2022;289:120217. DOI:10.1016/j.lfs.2021.120217; PMID:34896162. 摘要原文:'male 7-weeks old C57BL/6J mice were administered ad libitum 1% DSS solution';DSS 诱导的结肠炎在停药 18 天后恢复至对照水平,而 Bacteroides spp.、Alistipes spp. 等菌属多样性与组成仍改变。支持 strain=C57BL/6J、停药恢复与菌群相关局限、结肠炎-应激关联研究问题。
- MGI strain record C57BL/6J (MGI:3028467): Attributes: inbred strain; Synonyms: B6, B6J, Black 6, C57 Black; Collection: DO/CC Founder.
- NCBI Taxonomy record 10090: Mus musculus (house mouse), rank species.
- The Jackson Laboratory, All Black 6 Mice Are Not Created Equal (2013-08). 原文记载:NIH 群体独立繁育导致 'the emergence of two substrains: C57BL/6N and C57BL/6J'(N 指 NIH 来源、J 指杰克逊实验室亚系 000664);两亚系基因组存在区分编码序列的单核苷酸变异、插入缺失与结构变异,代谢、活动量、骨密度等表型直接比较中呈现差异。支持 J/N 为可遗传区分的亚系及表型差异;不涉及本条模型的实际采购来源。
- Nathalia L. Oliveira; Samantha Gruenheid. Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology. protocols.io, v1, 2026-07-31. DOI: 10.17504/protocols.io.kxygxr9jdg8j
- Epredia Signature Series Hematoxylin (7221), 产品信息页, Fisher Scientific
- Epredia Signature Series Bluing Reagent (7301), 产品信息页, Fisher Scientific
- Epredia Signature Series Eosin Y (7111), 产品信息页, Fisher Scientific
- Xylene, Fisherbrand HistoPrep (HC7001GAL), 产品信息页, Fisher Scientific
- Fisher Chemical Permount Mounting Medium (SP15 产品族), 产品信息页, Fisher Scientific
- Ethanol (CID 702, CAS 64-17-5), PubChem 化合物标准记录
- Tansey MG. SOP for DSS kinetics studies. protocols.io, v1, 2024-02-26.
- ARRIVE 2.0 guidelines