A53T 人α-突触核蛋白转基因研究模型（文献参考）

以Prnp启动子驱动人A53T α-突触核蛋白过表达的转基因模型。6月龄纯合子暗适应全视野ERG感光细胞a波与双极细胞b波振幅低于同窝野生型，OCT示外丛状层与外核层变薄，而TH阳性多巴胺能无长突细胞数量在该月龄仍保持。6月龄起出现嗅觉辨别与检测能力受损。8月龄后部分纯合子出现进行性运动表型，平均14-15月龄发病：梳理减少、体重下降与活动减少在先，继而运动障碍、部分肢体瘫痪、震颤与不能站立；8-12月龄可见广泛分布的α-突触核蛋白包涵体，密集蓄积于脊髓、脑干、小脑与丘脑，其出现与运动障碍起病平行。半合子表型类似但起病推迟至22-28月龄。

Study design

每只动物每天测定 4 次,连续 4 天;每组最多 5 只动物,单次 4 试次运行最多安排 4 组,试次之间间隔约 15–20 min。

Outcome measures

逐试次记录每只动物的最大时间与完成转数;每日读数取当日 4 次试次的平均时间与平均转数。跨日平均时间或转数升高提示运动协调与运动学习改善,降低提示受损;结果须结合年龄、转基因剂量与疾病阶段解释:晚成年期表现可能提高,并非所有动物随年龄下降。本读数为运动行为测量,不单独构成帕金森病的诊断依据。

Experimental animals

加速转棒行为测定

Age: 成年小鼠
Tissue: 活体小鼠,在体运动行为测定,不采集组织

Experimental procedures

接通转棒仪电源插上 Rotarod 电源线,打开仪器背后的电源开关。进入模式设置按 mode 键(F1)。选择加速模式按 Acceleration 键(F2)。设置加速时程将 Ramp Duration 设为 00:05:00。退出加速设置按 ESC。关闭反向旋转将 Reverse 设为 No。设置转速上限按 Alt 键进入 Speed 设置,将上限设为 50(仪器默认为 80)。设置转速下限按 Forward 键,将下限速度设为 5。复位旋转(不带加速) 按 Reset 复位旋转(此操作不带加速)。将动物放上转棒握住动物尾部,以轻柔的顺势动作将动物放到转动的棒上。检查挡板与计时归零确认各挡板已朝上,且所有动物通道的计时均为 0。启动试次并记录时间与转数按 Start 开始。试次完成判定:动物跌落到挡板上(若跌落时未压住挡板,须手动压下挡板停止计时),或动物连续完成两圈转动(单圈后如在 6–10 步内恢复,可让其继续测试)。记录每只动物的最大时间与转数。按 ESC 可查看最近一次试次的数据(使用该功能时,查看数据前不要取下挡板)。试次间以70%乙醇清洁棒面注意:在按 Reset 之前,每个试次之间用喷有 70% 乙醇的纸巾让转动的棒面在其上擦拭清洁(不要按压棒面)。取下挡板,清除动物粪便与尿液。装回挡板将挡板装回 Rotarod。复位仪器按 Reset。放上下一组动物将下一组动物放到棒上。翻起挡板将挡板向上翻起。开始下一组试次按 Start。计算每日平均时间与平均转数对每一天,计算每只动物当日 4 次试次的平均时间与平均转数。

Model identity

Model name: A53T 人α-突触核蛋白转基因研究模型（文献参考）
Species: mouse
Taxonomy ID: 10090
Strain: B6;C3-Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle/J
Genetic background: C57BL/6 × C3H（B6C3H）混合背景
Genotype / zygosity: 转有Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle转基因：小鼠朊蛋白（Prnp）启动子及其5'与3'非翻译区驱动全长（140氨基酸）人源A53T（Ala53Thr）突变α-突触核蛋白cDNA表达；半合子与纯合子均存活、可育、体型正常。
Modification locus: 12号染色体
Allele: Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle

Biological characteristics

Phenotype stage: 视网膜读出：6月龄纯合子已出现ERG功能减退与外层视网膜变薄，TH阳性无长突细胞尚未丢失。运动表型：纯合子8月龄后可起病、平均14-15月龄发病，包涵体病理集中于8-12月龄窗口并伴嗅障碍（6月龄起）；半合子起病推迟至22-28月龄。
Research questions: α-突触核蛋白聚集病理与多巴胺能系统功能的机制研究；视网膜作为可直接观测的中枢神经窗口，用于ERG/OCT无创生物标志物评价与左旋多巴药理学反应及帕金森病候选化合物的临床前筛查；适用于人神经元突触核蛋白病（如家族性帕金森病）研究。
Limitations: 文献参考模型，不代表公司实际保有、供应或质检。该模型为启动子驱动的人SNCA A53T cDNA过表达转基因插入系，非内源Snca点突变敲入，表型强度与起病时间依赖转基因剂量（纯合子早于半合子）。B6C3H背景可能携带Pde6brd1视网膜变性等位基因，评估视网膜表型前须将其从繁育群体剔除并以基因分型确认。仅支持突触核蛋白病相关研究范围，不等同于完整帕金森病。

Experimental methods

动物行为学测定

Experimental protocols

加速转棒行为测定
An accelerating rotarod assay of motor coordination, balance, and motor learning in freely moving mice: ramp duration set to 00:05:00 with speed capped at 50 (instrument default 80) and a minimum of 5; each mouse runs 4 trials per day for 4 consecutive days, with up to 5 animals per group and up to 4 groups per run separated by roughly 15-20 minutes; a trial ends when the animal falls onto the paddle or completes two consecutive rotations, and the daily average time and average rotations across the 4 trials form the readout; the rod is cleaned with 70% ethanol between trials.

Reagents and materials

70%乙醇
试次之间擦拭清洁转棒棒面的清洁液:喷于纸巾后让转动的棒面在其上擦拭,并在取下挡板后清除粪便与尿液残留

References

Model consultation