tumor challenge · protocol

Scope and method

Sample：mouse tumor

tumor challenge

• CCF1 肿瘤免疫宿主队列

  Age

  8-12 周（文献研究设计值，非公司实际批次）

  Sex

  Female

  Tissue

  tumor

Reagents and materials

• InVivoGrade 免疫检查点阻断抗体
• InVivoGrade 免疫检查点阻断抗体
• 胎牛血清 (FBS)
• DMEM/F12 基础培养基（文献参考配方）

Procedure

1. 肿瘤细胞系培养与准备

   MC38 小鼠结肠癌细胞株按文献参考体系培养：DMEM/F12 + 1% 非必需氨基酸 + 10% FBS + 1% 青霉素-链霉素（该体系为文献值，MC38 使用 DMEM/F12 而非 DMEM 高糖）。文献中 MC38 为耶鲁大学 Dr. Marcus Bosenberg 馈赠株，公司实际细胞来源、代次、鉴定与支原体 QC 未提供，不视同文献来源。收集对数生长期细胞计数，制备接种用细胞悬液；文献未规定接种载体与体积，本参考流程不添加未记载参数。

2. 皮下接种

   雌性小鼠（周龄 8–12 周；性别与周龄为文献研究设计值，非本公司实际动物批次记录），每只皮下接种 MC38 细胞 0.5×10⁶。文献本实验未描述麻醉、镇痛或针孔封闭措施，本参考流程不写入。

3. 肿瘤生长与体重监测

   给药研究期间每周 3 次测量瘤体、记录体重与临床观察；动物照护人员发现肿瘤破溃、体重下降超过 20% 或其他兽医照护问题时，将该鼠移出研究并按规范实施安乐死（文献退出标准）。

4. 抗 PD-1 与同型对照腹腔给药

   接种后第 7 天开始给药：治疗组腹腔注射抗小鼠 PD-1（文献参考克隆 29F.1A12，BioXCell BP0273）200 μg/只，每 3 天 1 次，共 4 次；对照组以同剂量同日程给予同型对照（文献参考克隆 2A3 抗三硝基苯酚大鼠 IgG2a，BioXCell BP0089）。两抗体分属治疗组与对照组，每只小鼠仅接受其一，不是同一只联用。公司检查点阻断抗体类资料未锁定克隆，不假定现有库存即为上述文献克隆。

5. 终点取材

   研究终点处死小鼠（文献参考方式：颈椎脱位），剥离肿瘤组织与周围皮肤。瘤体一部分按配套消化与流式参考流程制备单细胞悬液，其余按下游分析需要分份保存。

6. 肿瘤解离与基础 T 细胞流式分型

   按 VIII 型胶原酶/DNase I 参考消化液解离肿瘤（文献消化对象为经 10% DMSO/DMEM 冻存后解冻的样本，样本状态边界见配套流式方案），红细胞处理后以 Fc 阻断加基础小鼠 T 细胞表面抗体参考组合（CD45/CD3e/CD4/CD8a）染色，YO-PRO-1/DAPI 活性染色，流式采集分析；仅输出所选 marker 能支持的细胞比例。

Quality control and readouts

计划结局（文献依据）：瘤体大小/生长与体重变化、临床观察（每周 3 次）；瘤体经解离后以基础 T 细胞表面 marker 参考组合评估肿瘤浸润 T 细胞比例作为免疫学参考读数。本条为计划观察指标，不含实际结果数据。

Study design

文献参考设计（来源见参考文献：'Animal models' 与 'Tumor growth and ICI efficacy studies'）：全部小鼠雌性，研究设计周龄 8–12 周；MC38 细胞 0.5×10⁶/只皮下接种，接种后第 7 天开始抗 PD-1（29F.1A12）或同型对照（2A3）200 μg/只腹腔注射、每 3 天 1 次共 4 次；每周 3 次体重、瘤体与临床观察。本方案为文献来源的参考流程，不代表本公司已执行实验；文献另有'瘤体 75–110 mm³ 时单次给药、48 小时后取材'的独立实验，与本多次给药设计分属不同实验，不可拼合成本方案。实际样本量、公司伦理审批与执行结果未提供。

Inclusion and exclusion

文献参考退出标准：动物照护人员发现肿瘤破溃、体重下降超过 20% 或其他兽医照护问题时移出研究并安乐死；文献未给出肿瘤体积入组阈值或随机分组时点，保持未提供。

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