免疫组化常见问题

在免疫组化和免疫荧光中，大家在购买抗体、抗原修复、封闭、通透等前期过程都有一些小纠结，今天小优就来帮大家解释下这些小问题，补补坑。

石蜡切片和冰冻切片能用相同的抗体吗？

石蜡切片和冰冻切片，做为组织切片界的两大常用方法，各有所长，选择切片方法和抗体时要注意哦！

石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80度的低温冰箱中。而且石蜡切片可以切到4微米左右，得到的颜色/形态都较冰冻切片好。缺点是需要长时间的固定，要进行抗原修复，而且要经过高温浸蜡和烤片，可能会破坏组织的抗原性。

冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散； 切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。

抗体说明书介绍可做冰冻切片的是不一定能做石蜡切片，但是能做石蜡切片的，一般都可作冰冻切片。

封闭血清的选择原则是什么？

膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性

封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景

也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，切记不能与一抗来源一致哦。

在什么情况下进行组织抗原修复，抗原修复的条件是什么？

由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。

修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）

微波修复，我们一般用6min\*4次，效果不错。

在什么情况下使用Triton-X100？

Triton X-100化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚，是一种去污剂。在免疫组织化学( >10um厚切片) 和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂，在膜上打孔。

其作用原理：Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推荐使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。

Triton X-100既是一种表面活性剂，也有抗氧化作用。

文章来源 优宁维