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实验方法

总 RNA 提取

方法说明

方法分类
分子生物学
技术原理
从输入材料回收核酸级分并使目标输出物质为 RNA 的提取过程。常用一步法以酸性异硫氰酸胍-苯酚-氯仿混合液单次抽提:酸性条件下总 RNA 进入上水相,大部分 DNA 与蛋白留于界面或下层有机相,异丙醇沉淀回收;硅胶(或硅藻土)颗粒在异硫氰酸胍等裂解与灭酶条件下结合核酸,实现快速纯化;DNA 酶 I 处理用于去除残留的基因组 DNA。
输入样本
tissue · cell
可回答的研究问题
未提供
输出与判读
输出为纯化的总 RNA;纯度以微量紫外可见分光光度计的吸光比值评估(如 NanoDrop 报告的 A260/A280 与 A260/A230,分别指示蛋白与盐类等残留污染),完整性与可用性另可经电泳、qPCR、RNA-Seq 等技术确认;得率按起始材料计量比较。
适用条件
适用于动物(含人、小鼠)组织与细胞等起始材料的总 RNA 制备,作为逆转录、qPCR、表达芯片与测序等下游分析的输入;一步法可在数小时内完成,包括微量细胞或组织样品与大批量样品的处理。
局限
残留基因组 DNA 若未经 DNA 酶 I 等处理去除,其序列与逆转录产物共靶,会在 qPCR 定量中导致错误估计;不同提取方法在同一样品上的得率、完整性与纯度存在实测差异;CTAB 与 TRIzol 等传统方法步骤复杂、成本高,在小规模实验室的应用受限。

标准概念来源：OBI:0666666 · OBI · 2026-05-08

已发布模型

已发布方案版本

参考文献

  1. RNA extraction (OBI:0666666), OBI 2026-05-08
  2. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem. 1987;162(1):156-159. PMID:2440339; DOI:10.1006/abio.1987.9999.（酸性异硫氰酸胍-苯酚-氯仿单次抽提;高纯度未降解 RNA、4 小时内完成、适合大量样品与微量细胞或组织）
  3. Chomczynski P, Sacchi N. The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on. Nat Protoc. 2006;1(2):581-585. PMID:17406285; DOI:10.1038/nprot.2006.83.（酸性条件下 RNA 保留于上水相、大部分 DNA 与蛋白在界面或下层有机相;异丙醇沉淀回收;可自不同来源样品与细胞、组织分离总 RNA 并用于多种下游应用）
  4. Boom R, Sol CJ, Salimans MM, et al. Rapid and simple method for purification of nucleic acids. J Clin Microbiol. 1990;28(3):495-503. PMID:1691208; DOI:10.1128/jcm.28.3.495-503.1990.（利用异硫氰酸胍的裂解与灭核酸酶特性结合硅胶颗粒/硅藻土在变性条件下的核酸吸附实现 DNA、RNA 快速纯化）
  5. Zeng Y, Tang X, Chen J. Optimizing total RNA extraction method for human and mice samples. PeerJ. 2024;12:e18072. PMID:39346072; DOI:10.7717/peerj.18072.（人/小鼠组织总 RNA;微量紫外可见分光光度计 OD260/280 与 OD260/230 评估纯度,电泳、qPCR、RNA-Seq 确认质量;不同方法得率与纯度存在差异;CTAB 与 TRIzol 方法复杂、成本高妨碍小规模实验室应用）
  6. Gadkar VJ, Filion M. Development of a versatile TaqMan real-time quantitative PCR (RT-qPCR) compliant anchor sequence to quantify bacterial gene transcripts from RNA samples containing carryover genomic DNA. BMC Biotechnol. 2013;13:7. PMID:23369378; DOI:10.1186/1472-6750-13-7.（RNA 样品中残留基因组 DNA 与 cDNA 共靶导致 qPCR 错误定量;常规需以 DNA 酶 I 严格处理去除 carryover gDNA）
  7. Tang R, Liu J, Wang X, et al. Quality Control of RNA Extracted from PAXgene Blood RNA Tubes after Long-Term Cryopreservation. Biopreserv Biobank. 2026:314-319. PMID:41161697; DOI:10.1177/19475535251391040.（以 NanoDrop 2000 分光光度计按 A260/A280 与 A260/230 比值评估 RNA 纯度、Qubit 定量、Bioanalyzer RIN 评估完整性的质量控制流程）