LPS 相关急性肺部炎症模型（免疫研究参考）

文献记录肺部炎症细胞反应，以及细胞因子和趋化因子表达变化。

研究设计

以预先生成的 cDNA 为输入的 SYBR Green 实时定量 PCR 检测。每孔加入 10 ng cDNA，技术三重复；使用 PowerUp SYBR Green Master Mix 与 5 µM 正反向引物；按源方案循环条件扩增并读取 CT，以看家基因和参考实验组进行 ΔΔCT 分析。具体基因、引物和生物学分组按各研究设计确定。

结局指标

各样品目标序列的 CT 值；以看家基因归一化并以参考实验组计算 ΔΔCT/相对表达量。本方案不包含具体基因或疾病特异结论，输出判读依赖所选的引物、看家基因和实验分组。

实验动物

cDNA 模板的实时定量 PCR（qPCR，SYBR Green 分支）

组织: lung

实验步骤

qPCR 反应体系 **Option 2****: SYBR qPCR** qPCR 反应体系 Prepare SYBR Master mix (ul per well): 1. 5ul PowerUp SYBR Green Master Mix (#A25776, Applied Biosystem-ThermoFisher) 1. 1ul Primers (Forward and Reverse, diluted in Nuclease-free water at 5µM) qPCR 反应体系 Add 6ul of SYBR Master mix to each well with an automatic pipette (Multipette E3, Eppendorf) qPCR 反应体系 Add 4ul of cDNA per well (10ng cDNA) in technical triplicates to each well of LightCycler 480 Multiwell 384-plate (#4729749001, Roche Diagnostics) 热循环 Perform PCR using the following cycling conditions in a LightCycler® 480 System (Roche): 1. 50˚C for 2min 1. 95˚C for 2min 1. 95˚C for 15s + 60˚C for 1min (x40cycles) 数据分析 Using the LightCycler Software obtain the threshold cycles (CT) signals from each samples. 数据分析 Perform ΔΔCT-method to analyze the expression data using the endogenous control genes and the reference experimental group.

模型身份

模型名称: LPS 相关急性肺部炎症模型（免疫研究参考）
物种: Mus musculus

生物学特性

适用研究问题: 天然免疫应答及肺部炎症调控研究。
模型局限: 文献参考模型；LPS 炎症刺激不等同于活病原感染，不能代表传染病造模、病原传播或疫苗评价服务；不声明公司实际保有或已验证。

实验方法

RT-qPCR 通用

实验方案

cDNA 模板的实时定量 PCR（qPCR，SYBR Green 分支）
本方案采用 protocols.io 的 qPCR v1 中 SYBR Green 分支，输入为预先生成的 cDNA（每孔 10 ng），不包含 RNA 提取或反转录步骤。反应使用 PowerUp SYBR Green Master Mix 与正反向引物，在 LightCycler 480 系统按 50˚C 2 min、95˚C 2 min、95˚C 15 s + 60˚C 1 min 共 40 个循环扩增，读取 CT 并用 ΔΔCT 法分析。方案不指定具体基因、引物序列或疾病模型读数。

配套试剂与材料

SYBR Green qPCR Master Mix
SYBR Green 实时 qPCR 扩增
qPCR 正反向引物（5 µM）
SYBR Green qPCR 扩增引物
无核酸酶水（Nuclease-free water）
引物稀释

参考文献

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