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加速转棒行为测定

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An accelerating rotarod assay of motor coordination, balance, and motor learning in freely moving mice: ramp duration set to 00:05:00 with speed capped at 50 (instrument default 80) and a minimum of 5; each mouse runs 4 trials per day for 4 consecutive days, with up to 5 animals per group and up to 4 groups per run separated by roughly 15-20 minutes; a trial ends when the animal falls onto the paddle or completes two consecutive rotations, and the daily average time and average rotations across the 4 trials form the readout; the rod is cleaned with 70% ethanol between trials.

Scope and method

Sample：活体小鼠,清醒自由活动在转棒装置上完成运动测试;每只动物每天 4 次试次、连续 4 天。

动物行为学测定

Reagents and materials

Procedure

  1. 接通转棒仪电源

    插上 Rotarod 电源线,打开仪器背后的电源开关。

  2. 进入模式设置

    按 mode 键(F1)。

  3. 选择加速模式

    按 Acceleration 键(F2)。

  4. 设置加速时程

    将 Ramp Duration 设为 00:05:00。

  5. 退出加速设置

    按 ESC。

  6. 关闭反向旋转

    将 Reverse 设为 No。

  7. 设置转速上限

    按 Alt 键进入 Speed 设置,将上限设为 50(仪器默认为 80)。

  8. 设置转速下限

    按 Forward 键,将下限速度设为 5。

  9. 复位旋转(不带加速)

    按 Reset 复位旋转(此操作不带加速)。

  10. 将动物放上转棒

    握住动物尾部,以轻柔的顺势动作将动物放到转动的棒上。

  11. 检查挡板与计时归零

    确认各挡板已朝上,且所有动物通道的计时均为 0。

  12. 启动试次并记录时间与转数

    按 Start 开始。试次完成判定:动物跌落到挡板上(若跌落时未压住挡板,须手动压下挡板停止计时),或动物连续完成两圈转动(单圈后如在 6–10 步内恢复,可让其继续测试)。记录每只动物的最大时间与转数。按 ESC 可查看最近一次试次的数据(使用该功能时,查看数据前不要取下挡板)。

  13. 试次间以70%乙醇清洁棒面

    注意:在按 Reset 之前,每个试次之间用喷有 70% 乙醇的纸巾让转动的棒面在其上擦拭清洁(不要按压棒面)。取下挡板,清除动物粪便与尿液。

  14. 装回挡板

    将挡板装回 Rotarod。

  15. 复位仪器

    按 Reset。

  16. 放上下一组动物

    将下一组动物放到棒上。

  17. 翻起挡板

    将挡板向上翻起。

  18. 开始下一组试次

    按 Start。

  19. 计算每日平均时间与平均转数

    对每一天,计算每只动物当日 4 次试次的平均时间与平均转数。

Quality control and readouts

开始前确认全部挡板朝上且各动物通道计时归零;试次在动物跌落压板时结束,动物跌落而未压板时须手动压板停止计时;连续完成两转同样终止试次,单转后 6–10 步内恢复的动物可继续测试;查看上一试次数据(ESC)时不得先取下挡板;每个试次之间须以喷有 70% 乙醇的纸巾让转动的棒面擦拭清洁,不得按压棒面,并取下挡板清除粪便与尿液;每次实验须详细记录日期、时间、受试动物测试顺序、所执行的步骤细节及与测定相关的观察(如特定行为或操作错误)。

逐试次记录每只动物的最大时间与完成转数;每日读数取当日 4 次试次的平均时间与平均转数。跨日平均时间或转数升高提示运动协调与运动学习改善,降低提示受损;结果须结合年龄、转基因剂量与疾病阶段解释:晚成年期表现可能提高,并非所有动物随年龄下降。本读数为运动行为测量,不单独构成帕金森病的诊断依据。

Study design
每只动物每天测定 4 次,连续 4 天;每组最多 5 只动物,单次 4 试次运行最多安排 4 组,试次之间间隔约 15–20 min。

References

  1. Lee M. ROTAROD PROTOCOL. protocols.io v1, 2023-12-14. DOI:10.17504/protocols.io.eq2lyn2ywvx9/v1; 许可 Creative Commons Attribution (CC BY),要求署名原作者与出处。
  2. Graham DR, Sidhu A. Mice Expressing the A53T Mutant Form of Human Alpha-Synuclein Exhibit Hyperactivity and Reduced Anxiety-Like Behavior. J Neurosci Res. 2010;88(8):1777-1783. DOI:10.1002/jnr.22331; PMID:20077428。(混合 C57BL/6×C3H 背景 PrP-A53T 半合子小鼠以转棒评估运动协调与平衡及其随增龄变化:2 月龄落棒潜伏期短于对照,8 与 12 月龄晚成年期表现优于对照)
  3. The Jackson Laboratory 官方品系记录:Strain #004479 B6;C3-Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle/J(A53T alpha-synuclein transgenic line M83),含纯合子与半合子运动表型时间窗说明;页面取回于 2026-10-17。

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