LPP rat (LEC × PVG-derived Atp7b mutant)

Crossing LEC and PVG rats produced the LPP line with mutated Atp7b and wild-type NAT and coat-colour traits. LPP rats progressively accumulate hepatic copper and develop biochemical evidence of liver disease from around 90 days of age.

结局指标

获得可供光学显微镜观察的 H&E 染色组织切片：细胞核蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维粉红色，用于观察组织中细胞的整体结构与形态细节。本方案本身不产出病理评分数值，也不提供特定分子标志物的定量结果。

实验动物

Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology

年龄: 12-16 周龄(PMID:29473169)
组织: liver sections

实验步骤

脱蜡（Dewaxing）石蜡切片置于二甲苯中脱蜡 3 次，每次 00:03:00。复水（Rehydration）石蜡切片依次置于 100% 乙醇中 3 次、每次 00:03:00，再置于 95% 乙醇中 1 次、00:03:00，随后用水漂洗。苏木素核染色（Hematoxylin staining）石蜡切片以苏木素染液染色 00:00:20，随后在流水下冲洗 00:01:00。分化与返蓝（Differentiation and bluing）石蜡切片置于返蓝液中 00:01:00，随后在流水下冲洗 00:01:00；此步使细胞核呈现蓝色。伊红染色（Eosin staining）石蜡切片以伊红复染 00:00:10；此步使细胞质成分与结缔组织纤维呈现粉红色。脱水与透明（Dehydration and Clearing）石蜡切片依次置于 95% 乙醇中 00:02:00、100% 乙醇中 2 次、每次 00:02:00，随后置于二甲苯中 2 次、每次 00:02:00。封片（Mounting）石蜡切片以 Permount 封片介质加盖玻片封固。

模型身份

模型名称: LPP rat (LEC × PVG-derived Atp7b mutant)
物种: rat
品系: LPP
遗传背景: LEC x PVG congenic cross
基因型／合子状态: mutated Atp7b; wild-type serotonin N-acetyltransferase (NAT) trait and coat colour

生物学特性

适用研究问题: Which animal models reproduce hepatic and neurological Wilson disease, and which LEC phenotypes are attributable to Atp7b itself.
模型局限: Derived as a congenic control line for Atp7b specificity; copper-overload phenotype must be interpreted against the PVG-carried background.

实验方法

组织学分析

实验方案

Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。

配套试剂与材料

组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质

参考文献

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