APP/PS1 参考品系（B6;C3-Tg(APPswe,PSEN1dE9)85Dbo/Mmjax）

在目标脑区观察到 FastBlue 碱性磷酸酶底物形成的蓝色沉积，其分布与 6E10 反应性人源或人源化 Aβ/APP 表位一致；需结合阳性、阴性与内源 IgG 对照判读。该方案不单独区分 Aβ40 与 Aβ42，不把染色强度直接解释为不溶性斑块负荷或绝对浓度；如用于定量，需另建图像采集与分析方案。

每只动物报告百分比自发交替(交替次数/最大进入数,即三连进入次数/可能的三连总数,单位%)、臂进入总次数与移动距离;百分比交替显著降低提示工作记忆受损,判读以活动量指标与交替率不相关为前提。健康小鼠的百分比交替约为 70%,臂进入次数与移动距离同时反映运动与探索活动水平。

石蜡切片准备 在 2–3 µm 厚石蜡切片上进行免疫组织化学染色。 去除多余石蜡 56° 下去除多余石蜡 1h–24h。 复水 复水。 二甲苯脱蜡 二甲苯 4 次，每次 5 min。 异丙醇:二甲苯过渡 异丙醇:二甲苯 1:1 处理 1 次，3 min。 100% 异丙醇 100% 异丙醇处理 2 次，每次 3 min。 90% 异丙醇 90% 异丙醇处理 1 次，3 min。 70% 异丙醇 70% 异丙醇处理 1 次，3 min。 50% 异丙醇 50% 异丙醇处理 1 次，3 min。 蒸馏水洗涤 用蒸馏水洗涤 3 次。 抗原修复 进行抗原修复。 柠檬酸缓冲液热修复 用 1× 柠檬酸缓冲液（10 mM，pH 6）加热修复，蒸汽处理 30 min。 TBS 洗涤 用 TBS 洗涤 3 次。 甲酸处理 室温下用 98% 甲酸处理 1 min，用于 β-淀粉样蛋白免疫组织化学。 TBS 洗涤 用 TBS 洗涤 3 次。 过氧化氢封闭 室温下用含 3% 过氧化氢的 TBS 处理 10 min。 TBS 洗涤 用 TBS 洗涤 3 次。 正常山羊血清封闭 室温下用含 10% 正常山羊血清的 TBS 封闭 10 min。 倾去封闭液 倾去含 10% 正常山羊血清的 TBS，不洗涤，直接进入下一步。 一抗孵育 在湿盒中于室温下用含 10% 正常山羊血清的 TBS 孵育一抗过夜。一抗为 6E10（Zytomed Systems GmbH，货号 Z 932002-Y），靶标人 β-淀粉样蛋白，小鼠宿主，按 1:500 稀释。 TBS 洗涤 用 TBS 洗涤 3 次。 碱性磷酸酶二抗孵育 在湿盒中于室温下孵育碱性磷酸酶偶联二抗 2 h，二抗按 1:100 稀释；二抗为 Jackson ImmunoResearch 115-055-003，山羊抗小鼠 IgG。 TBS 洗涤 用 TBS 洗涤 3 次。 FastBlue 显色 用 FastBlue 显色 30–60 min：49 mL TBS（pH 7.5）、1 mL Naphtol AS Mix Phosphat、50 µL Levamisol、25 mg FastBlue，混匀后过滤。 TBS 洗涤 用 TBS 洗涤 3 次。 苏木素复染 苏木素复染 10 s。 流水冲洗 自来水冲洗 10 min。 Aquatex 封片 用 Aquatex 封片。

适应行为室 测试前将小鼠带入行为室,适应至少 01:00:00。 70% 乙醇清洁迷宫 每次测试前用 70% 乙醇清洁每个迷宫,晾干后再开始测试。 开始跟踪并放入迷宫中央 先启动 EthoVision 记录,再将动物放入迷宫中央;若有多台 Y 迷宫,同笼鼠可同时测试。 离开房间记录 8 分钟 实验者离开房间,记录 8 min 后将动物放回原饲养笼。 判定一次臂进入 当动物除尾部外全身进入臂内时,判定其进入了该臂。 界定自发交替与可能三连 百分比交替=自发交替次数/可能的三连总数。例如动物按 B、C、A、C、A、B 顺序进入臂时,计 2 次自发交替(BCA 与 CAB),可能三连共 4 个(BCA、CAC、ACA、CAB),即 50% 交替。 以跟踪软件读数计算百分比交替 EthoVision 报告交替次数与最大进入数,后者代表可能的三连数,百分比交替=交替次数/最大进入数;健康小鼠的百分比交替应约为 70%。 活动量混杂对照 对照检查:确认最大进入数或移动距离与百分比交替不相关;若两者存在相关,说明动物活动量使百分比交替判读失真,已不能准确反映工作记忆表现。