A53T alpha-synuclein transgenic mouse

以荧光显微镜在脑切片中观察TH阳性胞体与纤维并采集图像；本方案输出为免疫荧光染色与成像结果，不包含体视学细胞计数、纤维密度阈值或纹状体多巴胺浓度测定。

脑切片洗涤 用4% PFA/PBS洗涤脑切片一次。 去除固定液 以轻柔摇动或旋转5分钟，确保彻底去除固定液。 PBS漂洗 用PBS短暂漂洗，去除残留PFA。 封闭液配制 配制含10%驴血清和0.3% Triton-X的PBS封闭液。 封闭 室温下将切片在封闭液中孵育1小时，以减少非特异性结合。 均匀封闭 将切片置于摇床或旋转器上，使切片均匀接触封闭液。 一抗工作液配制 按下列组成配制一抗工作液。 加入鸡抗TH一抗 鸡抗TH抗体（Abcam，货号ab76442）。 稀释一抗 用含2.5%驴血清和0.3% Triton-X的PBS将一抗按1:200稀释。 一抗孵育 切片与一抗在室温孵育1小时。 湿盒孵育 在湿盒中孵育，防止液体蒸发。 一抗后洗涤 用PBS洗涤切片三次，每次5分钟。 轻柔洗涤 洗涤过程中保持轻柔摇动或旋转。 二抗孵育 与针对鸡IgG的荧光偶联二抗按1:1000在室温孵育1小时。 避光 避光以保护荧光。 终末洗涤 用PBS洗涤切片三次，每次5分钟。 避光洗涤 在避光条件下完成洗涤，以维持荧光完整性。 贴片 将切片贴于包被载玻片上。 Mowiol封片 用Mowiol封片介质覆盖切片并加盖玻片。 干燥 避光干燥至少30分钟后再成像。 荧光显微镜成像 使用Leica DM6000 B显微镜和10×物镜观察切片。 选择滤光片 使用合适的荧光滤光片组检测二抗信号。 调整曝光 调整曝光设置以优化信噪比。