AMLN 饮食相关 MASH 模型（文献参考）
AMLN（Amylin liver NASH）饮食为高脂（40 kcal% 脂肪）、高果糖（20 kcal%）并添加 2% 胆固醇的饮食，长期喂饲雄性小鼠可重现人 MASLD 的主要特征，谱系覆盖单纯脂肪变直至 MASH 与纤维化；肝线粒体超微结构随病程改变——脂肪变期线粒体形态基本正常，MASH 期明显肿胀，MASH-纤维化期出现嵴紊乱与基质丢失；呼吸链复合体活性、OXPHOS 蛋白水平与 ATP 生成随病程受抑，MASH-纤维化期线粒体自噬通路减少致损伤线粒体堆积；线粒体形态、线粒体自噬与 ATP 生成同时累及肝、脂肪、肌肉与心脏等多器官。
结局指标
获得可供光学显微镜观察的 H&E 染色组织切片：细胞核蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维粉红色，用于观察组织中细胞的整体结构与形态细节。本方案本身不产出病理评分数值，也不提供特定分子标志物的定量结果。
实验动物
- 年龄
- AMLN饮食喂饲14、22、28周时点（自6周龄起喂饲）
- 性别
- 雄性
- 组织
- liver（肝）
- 年龄
- AMLN饮食喂饲14、22、28周时点（自6周龄起喂饲）
- 性别
- 雄性
- 组织
- liver（肝）
- 年龄
- AMLN饮食喂饲14、22、28周时点（自6周龄起喂饲）
- 性别
- 雄性
- 组织
- liver（肝）
- 年龄
- 未记载周龄，终点取材组织切片 HE 判读（离体）
- 性别
- 雄性
- 组织
- liver（肝）
实验步骤
脱蜡（Dewaxing） 石蜡切片置于二甲苯中脱蜡 3 次，每次 00:03:00。 复水（Rehydration） 石蜡切片依次置于 100% 乙醇中 3 次、每次 00:03:00，再置于 95% 乙醇中 1 次、00:03:00，随后用水漂洗。 苏木素核染色（Hematoxylin staining） 石蜡切片以苏木素染液染色 00:00:20，随后在流水下冲洗 00:01:00。 分化与返蓝（Differentiation and bluing） 石蜡切片置于返蓝液中 00:01:00，随后在流水下冲洗 00:01:00；此步使细胞核呈现蓝色。 伊红染色（Eosin staining） 石蜡切片以伊红复染 00:00:10；此步使细胞质成分与结缔组织纤维呈现粉红色。 脱水与透明（Dehydration and Clearing） 石蜡切片依次置于 95% 乙醇中 00:02:00、100% 乙醇中 2 次、每次 00:02:00，随后置于二甲苯中 2 次、每次 00:02:00。 封片（Mounting） 石蜡切片以 Permount 封片介质加盖玻片封固。
模型身份
- 模型名称
- AMLN 饮食相关 MASH 模型（文献参考）
- 物种
- mouse
- NCBI Taxonomy ID
- 10090
- 品系
- C57BL/6N
- 遗传背景
- C57BL/6N 近交系野生型宿主（实验使用雄性小鼠，购于 Taconic Biosciences）；MASH 表型由 AMLN 饮食长期喂饲诱导，无基因改造背景。
生物学特性
- 表型出现阶段
- 自 6 周龄起喂饲 AMLN 饮食 14、22、28 周，三个时间点分别对应脂肪变、MASH 与 MASH-纤维化分期（每组 10 只雄性）。
- 适用研究问题
- MASLD/MASH 由脂肪变向纤维化进展的分期机制；多器官线粒体功能障碍与病程的对应关系。
- 模型局限
- 文献参考饮食范式，不代表公司实际保有、供应或质检；饮食诱导模型无基因改造品系身份编号，背景品系标识不等于模型身份编号。观察基于雄性 C57BL/6N 的 14/22/28 周分期分组（每组 10 只），雌性与其他品系的外推未由该研究支持；该研究未进行口服葡萄糖耐量与胰岛素耐量试验，胰岛素抵抗程度不在其数据内。
实验方法
实验方案
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。
配套试剂与材料
- 组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
- Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质
- Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
- Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
- Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
- 自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
- 组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
- 组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
- Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质
- 组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
- Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质
参考文献
- Meroni M, et al. Exploring multiorgan mitochondrial dysfunction in the switch toward progressive MASLD in AMLN mice. iScience. 2025;28:113449. DOI:10.1016/j.isci.2025.113449; PMID:41050429; PMCID:PMC12495477（正文经全文XML核对）. Animals and diet information 段逐字记载：'C57Bl/6 male mice (Taconic Biosciences, NY, USA)'，'C57BL/6N mice were fed an AMLN diet (40 kcal% fat, 20 kcal% fructose and 2% cholesterol) or standard diet (SD) for 14-22-28 weeks, starting from 6 weeks of age (n=10 mice/group)'——供应商为 Taconic，品系写作 C57BL/6N，未给出更细亚系后缀。结果段：喂饲 14/22/28 周对应 steatosis、MASH、MASH-fibrosis；线粒体由正常→肿胀→嵴紊乱与基质丢失；复合体活性/OXPHOS/ATP 随病程受抑、MASH-fibrosis 期 mitophagy 减少；肝、脂肪、肌肉、心脏多器官受累；未进行口服葡萄糖与胰岛素耐量试验。
- NCBI Taxonomy record 10090: Mus musculus (house mouse), rank species.
- Nathalia L. Oliveira; Samantha Gruenheid. Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology. protocols.io, v1, 2026-07-31. DOI: 10.17504/protocols.io.kxygxr9jdg8j
- Epredia Signature Series Hematoxylin (7221), 产品信息页, Fisher Scientific
- Epredia Signature Series Bluing Reagent (7301), 产品信息页, Fisher Scientific
- Epredia Signature Series Eosin Y (7111), 产品信息页, Fisher Scientific
- Xylene, Fisherbrand HistoPrep (HC7001GAL), 产品信息页, Fisher Scientific
- Fisher Chemical Permount Mounting Medium (SP15 产品族), 产品信息页, Fisher Scientific
- Ethanol (CID 702, CAS 64-17-5), PubChem 化合物标准记录
- ARRIVE 2.0 官方规范