GAN 饮食相关 MASH 模型（文献参考）
Gubra-Amylin NASH（GAN）饮食诱导的肥胖型活检确认MASH模型：高脂（4.49 kcal/g、40 kcal%脂肪，其中饱和脂肪酸按重量占46%）、高果糖（22%）、高蔗糖（10%）、高胆固醇（2%）的GAN饮食自由摄食驱动C57BL/6J小鼠肥胖与肝脏病变，表现为体重增长与肝肿大、血浆ALT/AST升高、血浆与肝脏甘油三酯和总胆固醇升高、血浆炎症因子（TNF-α、MCP-1、IP-10）升高；组织学为重度脂肪变（评分3）伴小叶炎症与进展性纤维化（可活检确认≥F1期），肝细胞气球样变轻微。模型伴肝细胞衰老特征：p21阳性肝细胞增多（参考研究报道较对照升高至约40倍）、γ-H2AX阳性细胞升高、p21+γ-H2AX共表达增加，SASP、细胞周期阻滞与DNA损伤相关基因程序上调；并出现肝脏线粒体功能受损，最大呼吸能力（复合体I+II与解偶联后ETS）与脂肪酸β-氧化关键酶β-HAD活性下降，线粒体脂肪酸氧化相关基因亚组下调。
结局指标
获得可供光学显微镜观察的 H&E 染色组织切片：细胞核蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维粉红色，用于观察组织中细胞的整体结构与形态细节。本方案本身不产出病理评分数值，也不提供特定分子标志物的定量结果。
ALT 活性，单位 U/L；比较同一检测体系下各组与时间点的变化。
实验动物
- 年龄
- 起始喂药时 5–6 周龄；肝组织取材终点随分组（最长至 58 周）
- 组织
- liver（肝）
- 年龄
- 开始喂饲时5–6周龄；GAN饮食喂饲最长58周
- 组织
- liver（肝）
- 年龄
- 开始喂饲时5–6周龄；GAN饮食喂饲最长58周
- 组织
- liver（肝）
- 年龄
- 开始喂饲时5–6周龄；GAN饮食喂饲最长58周
- 组织
- liver（肝）
- 年龄
- 未记载周龄，终点取材组织切片 HE 判读（离体）
- 组织
- liver（肝）
- 年龄
- 8 周龄起喂饲 GAN 饮食（D09100310）；约每 8 周眼眶取血纵向监测，观察期终点 32 周
- 性别
- 雄性
- 组织
- plasma（血浆）
实验步骤
脱蜡（Dewaxing） 石蜡切片置于二甲苯中脱蜡 3 次，每次 00:03:00。 复水（Rehydration） 石蜡切片依次置于 100% 乙醇中 3 次、每次 00:03:00，再置于 95% 乙醇中 1 次、00:03:00，随后用水漂洗。 苏木素核染色（Hematoxylin staining） 石蜡切片以苏木素染液染色 00:00:20，随后在流水下冲洗 00:01:00。 分化与返蓝（Differentiation and bluing） 石蜡切片置于返蓝液中 00:01:00，随后在流水下冲洗 00:01:00；此步使细胞核呈现蓝色。 伊红染色（Eosin staining） 石蜡切片以伊红复染 00:00:10；此步使细胞质成分与结缔组织纤维呈现粉红色。 脱水与透明（Dehydration and Clearing） 石蜡切片依次置于 95% 乙醇中 00:02:00、100% 乙醇中 2 次、每次 00:02:00，随后置于二甲苯中 2 次、每次 00:02:00。 封片（Mounting） 石蜡切片以 Permount 封片介质加盖玻片封固。
配制工作试剂 将五份 R1 与一份 R2 混合配成工作试剂。 分装试剂 向标记好的样本管和质控管中各加入 1.0 mL 工作试剂。 预温 所有试管在 37°C 预温至少五分钟。 仪器调零 在 340 nm 下用蒸馏水将分光光度计调零。 加入样本 向对应试管加入 100 µL（0.10 mL）样本，轻轻混匀后转入恒温比色皿。 读取吸光度 在 1 min 读取吸光度；继续在 37°C 孵育，并在第 2 和第 3 分钟再次读取，确认变化速率恒定。 计算活性 求每分钟吸光度变化的平均值（ΔA/min），乘以 1768，得到 ALT 活性（U/L）。 逐样本检测 对每份样本重复上述检测；非恒温比色皿在各次读数间保持 37°C 孵育。
模型身份
- 模型名称
- GAN 饮食相关 MASH 模型（文献参考）
- 物种
- mouse
- NCBI Taxonomy ID
- 10090
- 品系
- C57BL/6J
- 遗传背景
- C57BL/6J近交系野生型宿主；MASH状态由GAN饮食长期喂养诱导，无基因改造背景。
- 基因型／合子状态
- 非基因改造（GAN饮食诱导）
生物学特性
- 表型出现阶段
- 诱导病程：自5-6周龄起喂饲GAN饮食，参考研究喂饲34周后以肝活检确认重度脂肪变与纤维化≥F1期作为造模基线，对照普通饲料组同期观察；衰老与SASP相关基因特征在持续GAN喂饲38周后高度显现并维持；持续喂饲约58周时一致发生肝细胞癌。
- 适用研究问题
- MASH发生发展中肝细胞衰老、线粒体功能障碍与脂肪毒性代谢的机制研究；饮食干预（改回普通饲料）对代谢、组织学与转录指标逆转窗口的比较；具senolytic（清除衰老细胞）潜力的药物治疗评价。
- 模型局限
- 文献参考饮食范式模型，不代表公司实际保有、供应或质检；诱导模型无基因改造MGI品系编号，背景品系标识不等于模型身份编号。动物性别未在该模型文献中注明，不能按惯例假定为雄性；各处理组样本量与8/16/24周饮食逆转时程为特定研究分组设计，不构成全部GAN-DIO-NASH动物的统一观察窗。饮食逆转带来的体重、生化与组织学改善是该研究的干预结果，不表示所有动物自然按此轨迹逆转，且该研究中逆转至24周纤维化分期仍未改善。持续喂饲约58周后一致发生肝细胞癌，长时程观察窗内的衰老信号解读受成瘤活动影响。
实验方法
实验方案
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。
- Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology
本方案用于固定、石蜡包埋组织切片（4 μm）的苏木素-伊红（H&E）染色：经脱蜡、复水、苏木素核染、返蓝、伊红复染、脱水透明与封片七个步骤，使细胞核呈蓝紫色、细胞质与结缔组织纤维呈粉红色，供光学显微镜下观察组织中细胞与整体结构形态。
- 血样 ALT 活性测定（Teco A524 动力学法）
使用 Teco A524 液态试剂，以 340 nm 下 NADH 吸光度下降速率定量血样 ALT 活性，用于反映肝细胞损伤。
配套试剂与材料
- 组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
- Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质
- 组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
- Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质
- Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
- Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
- Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
- 自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
- 组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
- 组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
- Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质
- 组织学二甲苯（混合异构体）
脱蜡剂
- Ethanol
复水梯度溶剂（去除二甲苯）
- 95% 乙醇溶液
复水梯度溶剂
- 自来水（组织学染色用）
复水后漂洗用水（后续各流水冲洗共用）
- Epredia Signature Series 苏木素染液（7221）
细胞核染色
- Epredia Signature Series 返蓝液（7301）
返蓝（使细胞核转蓝）
- Epredia Signature Series 伊红 Y 染液（7111）
细胞质与结缔组织纤维复染
- Permount 组织学封片剂（Fisher SP15）
封片介质
- ALT (SGPT) 液态试剂试剂盒（动力学法，Teco Diagnostics A524-150）
血浆 ALT 动力学法测定体系
技术服务
浏览技术服务参考文献
- Dietary intervention reverses molecular markers of hepatocellular senescence in the GAN diet-induced obese and biopsy-confirmed mouse model of NASH. BMC Gastroenterol 2024;24:73. DOI:10.1186/s12876-024-03141-x; PMID:38308212. 原文方法学定明C57BL/6J小鼠5-6周龄起喂GAN饮食（4.49 kcal/g，40 kcal%脂肪、46%饱和脂肪按重量、22%果糖、10%蔗糖、2%胆固醇，Research Diets D09100310）或普通饲料至58周，34周活检筛选重度脂肪变（3分）伴纤维化≥F1期入组，报告代谢、组织学、线粒体呼吸与p21/γ-H2AX/SASP衰老标志及讨论中约58周一致发生HCC的引用记载。
- NCBI Taxonomy官方记录：Mus musculus (Mouse)，taxid 10090。页面取回于2026-10-17。
- Nathalia L. Oliveira; Samantha Gruenheid. Hematoxylin and Eosin (H&E) staining for histopathology. protocols.io, v1, 2026-07-31. DOI: 10.17504/protocols.io.kxygxr9jdg8j
- Epredia Signature Series Hematoxylin (7221), 产品信息页, Fisher Scientific
- Epredia Signature Series Bluing Reagent (7301), 产品信息页, Fisher Scientific
- Epredia Signature Series Eosin Y (7111), 产品信息页, Fisher Scientific
- Xylene, Fisherbrand HistoPrep (HC7001GAL), 产品信息页, Fisher Scientific
- Fisher Chemical Permount Mounting Medium (SP15 产品族), 产品信息页, Fisher Scientific
- Ethanol (CID 702, CAS 64-17-5), PubChem 化合物标准记录
- Teco Diagnostics. ALT (SGPT) Liquid Reagent (Kinetic Method), A524. Revision 02/2018.
- Chan AP et al. Intestinal lipase inhibition uncouples diet-induced obesity from MASH by remodeling the hepatic lipidome in mice. J Lipid Res (2026), DOI 10.1016/j.jlr.2026.101112; PMID 42508572.
- ARRIVE 2.0 官方规范