技术服务

实验方法

• immunohistochemistry

  组织切片中的蛋白抗原，本条目用于阿尔茨海默病研究时的目标抗原包括：β-淀粉样蛋白（Aβ40、Aβ42 及泛 Aβ 表位，如 4G8 与 Aβ 末端特异性抗体）、异常磷酸化 tau（AT8 表位）、小胶质细胞标记 IBA1 与 F4/80、星形胶质细胞标记 GFAP，以及神经元标记 NeuN。

• insulin assay

• KIM-1/ALT/AST 损伤标志物 ELISA/qPCR

• leptin assay

• mass measurement assay

  肿瘤湿重（mg 或 g）

• mass spectrometry assay

  SCFAs

• metabolomics by mass spectrometry assay

• Nissl 染色

• PAS 染色 (糖原/粘蛋白)

• PK/PD 基因多态性关联分析

实验方案

方案是方法的具体实例，明确指标、样本、检测步骤与质量控制；相关技术服务单独关联。

• 脑切片 TTC 染色与梗死面积测定

  版本 8

  新鲜脑以2mm冠状切片逐孔经2% TTC（0.1M PBS）37°C避光染色30分钟后固定保存，体视成像并以患侧/对侧半球面积比计算梗死面积百分比。

• 大鼠 Morris 水迷宫空间定位与再学习测定

  版本 3

  利用自动升降平台与远端视觉线索记录大鼠的空间定位表现。每天更换平台位置，按到达平台与否选择相应处理路径，再进行第二次定位；记录到台潜伏期和游泳轨迹。

• 脑切片酪氨酸羟化酶（TH）免疫荧光染色

  版本 5

  脑切片经4% PFA/PBS洗涤、10%驴血清/0.3% Triton-X封闭后，以鸡抗TH抗体ab76442（1:200）和抗鸡IgG荧光二抗（1:1000）孵育，Mowiol封片并以荧光显微镜成像，用于TH阳性胞体与纤维的定位观察。

• 脑切片酪氨酸羟化酶（TH）免疫荧光染色

  版本 4

  脑切片经4% PFA/PBS洗涤、10%驴血清/0.3% Triton-X封闭后，以鸡抗TH抗体ab76442（1:200）和抗鸡IgG荧光二抗（1:1000）孵育，Mowiol封片并以荧光显微镜成像，用于TH阳性胞体与纤维的定位观察。

• 脑组织 RNA 第一链 cDNA 合成

  版本 1

  以纯化的脑组织总 RNA 为模板，使用 ProtoScript II 反转录酶合成第一链 cDNA，供后续基因表达检测。

• 脑组织总 RNA 提取与柱上 DNA 去除

  版本 1

  以 TRIzol 裂解脑组织，经氯仿分相、硅胶柱结合和 DNase 处理，回收用于表达分析的总 RNA。

• 大鼠脑组织 Sirt1 转录本定量（cDNA qPCR）

  版本 1

  分别扩增 Sirt1 与 GAPDH，以 GAPDH 为内参，比较大鼠脑组织来源 cDNA 中的 Sirt1 相对表达量。

• Y 迷宫自发交替检测

  版本 3

  本方案记录小鼠在对称 Y 迷宫中 8 min 的自由探索,以自发交替百分比评估工作记忆:动物进入行为室适应至少 01:00:00 后,放入经 70% 乙醇清洁并晾干的迷宫中央,由 EthoVision 视频跟踪记录臂进入;百分比交替由交替次数与最大进入数之比得出,并以进入次数或移动距离与交替率的相关检查判断活动量是否干扰结果。

• FFPE 脑切片 6E10 碱性磷酸酶免疫组织化学检测 Aβ/APP

  版本 5

  本方案采用 6E10 小鼠单克隆抗体在 2–3 µm FFPE 脑切片上进行碱性磷酸酶免疫组织化学染色，依次完成脱蜡复水、柠檬酸缓冲液热抗原修复、甲酸处理、过氧化氢与正常山羊血清封闭、一抗过夜孵育、碱性磷酸酶二抗孵育、FastBlue 显色及苏木素复染。6E10 识别包括 APP 在内的 β-淀粉样蛋白表位，染色信号不等同于仅由不溶性斑块产生，也不能给出 Aβ40/Aβ42 的绝对浓度。采用版本验证的样品为 FFPE 人脑组织；用于表达人源或人源化 Aβ 的小鼠模型脑组织时，需设置内源 IgG 与阴性对照并在结果解释中保留该边界。

• 小鼠海马切片PSD95免疫荧光检测

  版本 1

  通过PSD95免疫荧光标记观察小鼠海马切片的突触后蛋白分布，并以DAPI标记细胞核。